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Biochrom30+氨基酸分析儀檢測石斑魚中水解氨基酸

大昌洋行(上海)有限公司(大昌華嘉)  2019-09-16  點擊217次

Biochrom30+氨基酸分析儀檢測石斑魚中水解氨基酸

摘要:

以石斑魚為原料,使用Biochrom30+全自動氨基酸自動分析儀對其肌肉的氨基酸組成進行分析。結果表明石斑魚肌肉中氨基酸總量的質量百分比為17753.114mg/100g,必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸總量的40.63%,鮮味氨基酸占氨基酸總量的38.52%。

  1. 樣品前處理

  2. 所用試劑

    1. 濃鹽酸,濃度≥36%,優級純

    2. 6mol/L 鹽酸:取500mL 鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻。

    3. 水:去離子水

    4. 苯酚:須重蒸

    5. 17種氨基酸標準品

行號

氨基酸

行號

氨基酸

1

Asp

天冬氨酸

2

Thr

蘇氨酸

3

Ser

絲氨酸

4

Glu

谷氨酸

5

Pro

脯氨酸

6

Gly

甘氨酸

7

Ala

丙氨酸

8

Cys

胱氨酸

9

Val

纈氨酸

10

Met

蛋氨酸

11

Ile

異亮氨酸

12

Leu

亮氨酸

13

Tyr

酪氨酸

14

Phe

苯丙氨酸

15

His

組氨酸

16

Lys

賴氨酸

17

Arg

精氨酸




  1. 前處理設備

  2. 分析天平:感量分別為 0.0001g和0.00001g。

  3. 水解管:耐壓螺蓋玻璃試管,體積為25mL

  4. 勻漿機。

  5. 無油真空泵

  6. 干浴水解濃縮儀

  7. 移液管

  8. 0.22um濾膜

  9. 樣品制備(參考國標GB 5009.124-2016

    原料魚手工去除魚鱗、魚皮、魚刺和內臟,采肉后清洗、瀝干,在勻漿機中打成肉糜,于-18℃冰箱中冷凍保存,分析時取出解凍后使用。

  10. 試樣水解

    稱取含蛋白7.5-25mg的試樣,加入水解管中,加入15mL 6mol/L鹽酸,繼續向水解管內加入苯酚3滴~4滴。冷凍3min~5min,接到真空泵的抽氣管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮氣,重復抽真空-充入氮氣3次后,在充氮氣狀態下擰緊螺蓋。 將水解管放入干浴水解濃縮儀中,110°C水解22-24h,冷卻、混勻、開管、轉移并定容到50ml容量瓶中,用移液管取適量樣液,在干浴水解濃縮儀中50°C吹干,必要時加入少許水,重復吹干1-2次,加入3-5mL PH2.2的稀釋上機用檸檬酸鈉緩沖液溶解,振蕩混勻后,吸取溶液通過0.22μm 濾膜后,轉移至儀器進樣瓶,為樣品測定液,供儀器測定用

  11. 分析方法描述(Biochrom 30+

    氨基酸分析儀分析方法參數:

  12. 色譜柱:Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱,4.620cm

  13. 分離程序:

NO.

Time

Temp

Buffer

Pump

Nin

Rec

Commands

1

01:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF


2

00:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF

Reset

3

01:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF

Load

4

06:40

48

1

35.0ml/h

ON

ON


5

13:00

52

2

35.0ml/h

ON

ON


6

01:00

52

5

35.0ml/h

ON

ON


7

16:00

95

5

35.0ml/h

ON

ON


8

04:00

95

6

35.0ml/h

ON

ON


9

04:00

95

1

35.0ml/h

ON

ON


10

09:00

48

1

43.0ml/h

OFF

OFF


11

02:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF


End








  1. 運行時間:經分析時間+再生時間 57min

  2. 反應單元溫度:135°C

  3. 檢測波長:570nm440nm同時檢測。

  4. 樣品中氨基酸含量的計算

    樣品測定液氨基酸的含量按式(2)計算:

    ci = cs /As ×Ai ……………………(2)

    式中:

    ci ———樣品測定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

    Ai ———試樣測定液氨基酸i的峰面積;

    As ———氨基酸標準工作液氨基酸s的峰面積;

    cs ———氨基酸標準工作液氨基酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL)。

    試樣中各氨基酸的含量按式(3)計算:

    Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×109) ×100 ……………………(3)

    式中:

    Xi ———試樣中氨基酸i的含量,單位為克每百克(g/100g);

    ci ———試樣測定液中氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

    F ———稀釋倍數;

    V ———試樣水解液轉移定容的體積,單位為毫升(mL);

    M ———氨基酸i的摩爾質量,單位為克每摩爾(g/mol);

    m ———稱樣量,單位為克(g);

    109 ———將試樣含量由納克(ng)折算成克(g)的系數;

    100 ———換算系數。

    附、石斑魚分析圖譜及做樣結果

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